21 2025.04
KASP引物設(shè)計開發(fā)
KASP(Kompetitive Allele-Specific PCR,競爭性等位基因特異性PCR)是一種基于PCR的基因分型技術(shù),主要用于檢測單核苷酸多態(tài)性(SNP)和其他特定基因變異。廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)育種、醫(yī)學(xué)研究 [...]
13 2025.03
怎樣在線做PCR引物設(shè)計
要先對PCR目的序列的長度有個大致估計:
第一步:找到Primer3的站點。你不用記住這個站點,但是要記住“Primer3”這個詞,然后打開GOOGLE首頁,輸入Primer3,跳出來的第一個項目就是了“Prim [...]
13 2025.03
DNA電泳常見問題分析之一
1 請問配制聚丙烯酰胺凝膠電泳膠時,促凝的是TEMED還是過硫酸銨?膠聚時間很長如何解決?
過硫酸銨提供驅(qū)動丙烯酰胺和雙丙烯酰胺聚合所需的自由基,而TEMED通過催化過硫酸銨形成自由基而 [...]
13 2025.03
PCR常見問題分析之二/克隆
1 克隆PCR產(chǎn)物的最優(yōu)條件是什么?
最佳插入片段:載體比需實驗確定。1:1(插入片段:載體)常為最佳比,摩爾數(shù)比1:8或8:1也行。應(yīng)測定比值范圍。連接用5ul 2X連接液, 50ng質(zhì)粒DNA,1Wei [...]
13 2025.03
核酸純化常見問題分析之二/質(zhì)粒提取
1、從柱離心式產(chǎn)品的流行看經(jīng)典方法的缺點 (或者操作重點)
柱式方法的風(fēng)行是無法否定的現(xiàn)實。下面通過柱式方法與經(jīng)典方法的比較,看一看如何注意經(jīng)典方法的操作重點。
裂解,二者幾乎沒 [...]
13 2025.03
如果不慎發(fā)生污染情況,該怎么辦?
如果不慎發(fā)生污染情況,應(yīng)從下面幾條出發(fā),逐一分析,排除污染。
(1)設(shè)立陰陽性對照:有利于監(jiān)測反應(yīng)體系各成分的污染情況。選擇陽性對照時,應(yīng)選擇擴增弱,且重復(fù)性好的樣品,因強陽性 [...]
13 2025.03
PCR常見問題分析之一
1 PCR產(chǎn)物的電泳檢測時間
一般為48h以內(nèi),有些最好于當日電泳檢測,大于48h后帶型不規(guī)則甚致消失。
2 假陰性,不出現(xiàn)擴增條帶,應(yīng)該怎么辦?
PCR反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)有①模板核酸的制 [...]
13 2025.03
核酸純化前應(yīng)了解的常見問題
1、 在提核酸前,對實驗樣品你應(yīng)該知道什么?
樣品的核酸含量、酶含量、特殊雜質(zhì)含量。
絕大情況下,使用新鮮樣品可以獲得最好的結(jié)果,但對一些雜質(zhì)含量高的樣品,-20℃保存一天后抽提,可 [...]
13 2025.03
PCR操作時應(yīng)注意的事項
PCR檢測微量感染因子時,容易因為污染的而導(dǎo)致各種問題,因此,進行PCR操作時,操作人員應(yīng)該嚴格遵守一些操作規(guī)程,最大程度地降低可能出現(xiàn)的PCR污染或杜絕污染的出現(xiàn)。
(1)劃分操作區(qū) [...]
13 2025.03
PCR Mix的擴增產(chǎn)物能直接測序嗎?
可以。測序公司在進行PCR產(chǎn)物直接測序前,會對PCR產(chǎn)物進行純化,去除體系中影響測序的組分,所以PCR Mix中的溴酚藍并不會影響后續(xù)測序反應(yīng)。
東盛生物提供含溴酚藍和不含溴酚藍兩種體系, [...]
13 2025.03
實驗室自己可以配制PCR Mix嗎?
可以。但實驗室自配的PCR Mix穩(wěn)定性差,無法長期保存,且易出現(xiàn)靈敏度低、擴增長度短、重復(fù)性差等問題,而東盛的PCR Mix添加了特殊的穩(wěn)定劑,可以確保在室溫2周或-20℃2年的條件下,擴增效 [...]
13 2025.03
怎樣使用凝膠成像系統(tǒng)的定量分析
快捷指南Volumes Quick Guide,此功能能對任意所選區(qū)域進行定量分析,此分析可以報告2個結(jié)果:相對濃度和絕對濃度(如有濃度標準樣品)
1. ?選擇成像系統(tǒng)或打開已保存的文件(軟件可以控制 [...]